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实验耗材如何选择:你需要知道的PCR耗材的8个不同方面

来源: | 发布日期:2022-10-10 | 浏览量:1

今天,尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网来聊一聊PCR实验中的一个关键要素——耗材。作为PCR的常客,了解PCR耗材相关的特性和术语是很有必要的。

市面上的PCR耗材琳琅满目,品牌、规格、颜色等琳琅满目,令人眼花缭乱。让尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网一步一步来了解它。

pcr板

 1.材料

通常,PCR耗材的原材料是聚丙烯。是一种良好的耐热惰性材料。工作温度范围为-30~140℃,使其能够承受PCR反应热循环过程中的热能变化,对PCR反应体系中的物质起到很好的密封和保护作用。

 2. 颜色

常见的有白管和透明尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网:pcr管 在传统的 PCR 实验中,两者没有区别。然而,在同一个实时/qPCR 实验中,对于具有顶端信号读取的 qPCR 仪器,白管相对更敏感和一致(参见下图 A 和 B)。 为什么是这样?


pcr管

与透明管相比,A:白色管的 Ct 值较低;B:用白色管获得更好的重复性。

qPCR的核心数据是Ct值,而荧光信号是计算Ct值的数据源,因此管内的荧光能否完整传输到检测器非常重要。白色的管壁阻止荧光穿过管壁和折射(下图A),从而阻止荧光传输到加热模块(即放置管的金属孔壁)并被模块吸收或不一致反映。 与透明管相比,在白色管的尖端收集到了更强、更集中的荧光信号(下图 B)。


pcr管

A:透明管和白管中荧光信号的变化趋势; B:加入等量荧光素后,荧光强度比较。

因此,如果您使用的是顶读 qPCR 仪器,不妨试试白色试管。

 3.质量(精益或不精益

这里强调了耗材质量的重要性。qPCR 耗材必须不含污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和 DNase,但不能去除灰尘和 DNA 残留物,它们可能会抑制 PCR 反应或产生非特异性扩增。 物质具有吸光度,即使是微小的污染物也会吸收反应体系中的荧光,影响荧光信号的采集。实验的夸张版本用于证明杂质污染对实验的影响。如下图所示,在八联管的其中一个反应孔中放置了一个杂质。 正如预期的那样,扩增曲线显示出明显的异常。


pcr反应管中的杂质

↑ 反应管中的杂质

8联排管

↑ 8管条重复反应结果,左井杂质使曲线“偏离”。

温馨提示:注意不要让耗材长时间暴露在空气中。取出耗材后,请务必迅速封好包装袋,避免徒手接触。 如果可能,请在超净工作台上操作。

 4.容量/ 尺寸 / 通量

体积决定了可以加载多少样品(反应体积)。剂量过多可能导致传热效率降低、溢出或交叉污染; 而剂量不足可能会导致样品蒸发损失。 qPCR 仪器的加热模块还将确定适用的耗材和适用的反应系统尺寸。吞吐量很容易理解,它是单个实验中可以加载的最大样本数。常用容量和通量规格如下表所示:

单管/八排 0.2mL、0.1mL
尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网:96孔板 0.2mL、0.1mL
384孔板 0.2mL


容量规格通常也分为标准型和低型,如下所示。低调耗材的高度较低。这种短小的设计最大限度地减少了反应系统上方的空间(“死体积”——无用的部分),减少了热循环过程中蒸发的影响,并使加热模块能够更大程度地包裹它,以提高传热效率。 因此,低剖面管也称为“快速”管或板。


pcr管


温馨提示:一般常用的反应体积为20 µL,推荐使用0.1 mL或小体积的小体积反应管。

 5.管壁 厚度

管壁的厚度会直接影响导热系数。PCR 耗材应具有均匀的壁厚,以提供一致的热传递。 超薄管壁比标准版薄50%,进一步降低热障,带来更快更好的反应效果。 因此,为了最大限度地提高 PCR 反应的效率,确保反应稳定高效,均一且超薄的 PCR 耗材是最佳选择。

 6. 透明度

qPCR的管盖和密封膜需要具有较高的光学透明度,以确保荧光信号的最佳穿透和传输,同时减少失真(适用于top-read qPCR仪器)。管壁的透明度越高,可能会影响实验结果。 原因上面已经解释过了。传统的 PCR 可以忽略这个特性。

 7.裙板

尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网:PCR板的裙边是指板的周边延伸部分。 在构建反应系统时,该裙边可作为移液过程的稳定支撑,并在结合自动化工作站时提供机械强度和抓握力。 常见的有无裙、半裙和全裙三种(分别对应下图中的A、B、C)。

无裙板: 可用于大多数 PCR 或 qPCR 仪器,但不适用于自动化应用。在移液过程中容易移动,不是很稳定,需要与板架一起使用。

半裙板: 适用于具有良好移液稳定性的自动化应用。

全裙边板: 非常适合自动化应用。机械强度好,适用于带有突出模块的PCR仪器,移液过程中稳定性高。

pcr板

Tips:裙边的意义更多的是便于工业化和自动化批处理,与机械臂相结合。 在传统的研究实验室中可能不需要它,无裙板就足够了。



pcr板



8. 封口膜

尊龙凯时(中国)人生就是搏! 官网:PCR板密封膜由透明塑料或铝箔制成。 粘性透明膜较为常见,适用于96或384孔板,应具有足够好的透光率。 封膜时,会用小卡片将封孔周围的膜压紧,以免出现漏气等现象。

粘性铝膜可能不太常见。虽然不适用于qPCR,但它是光敏样品最理想的耗材。 因为它可以被打孔,所以便于PCR中的样品转移(对于传统PCR)。

pcr板封膜


总结

作为PCR系统的载体,耗材对于提高实验数据的质量非常重要。希望本次分享能够帮助您了解PCR耗材的一些小技巧,为更好地选择耗材提供帮助。

【本文标签】 pcr板 pcr管 8联排管

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